1、動物組織：主要原料是雞冠和牛眼玻璃體等。用丙酮或乙醇將原料脫脂、脫水，用蒸餾水浸泡、過濾，然后以氯化鈉水溶液和氯仿溶液處理，之后加入胰蛋白酶保溫后得到混合液，最后用離子交換劑進行處理、純化得到精制的透明質酸。這種方法提取率極低，僅1%左右，分離過程復雜，致使透明質酸價格昂貴，達5000美元/公斤，限制了在化妝品中大的量使用。
2、微生物發酵：以葡萄糖作為碳源發酵液。在培養基中發酵48小時，發酵結束后，過濾除去菌絲體和雜質，然后用醇沉淀法等簡單操作即得到高純度的產物。采用發酵法制造的透明質酸，優點是能按商品設計來設定分子量大小。發酵法的關鍵在于菌種的選擇，多選用鏈球菌、乳酸球菌類等。
3、化學合成：采用天然酶聚合反應；首先使用多糖類聚合物合成透明質酸氧氮雜環戊烯衍生物，然后添加水分解酶，制造出衍生物和酶的復合體，最后在90度攝氏反應液中清除其中的酶，就合成了透明質酸。采用人工合成法可大大降低透明質酸的制造成本，但結構較不精純。